Isu pengedap dan pencemaran dalam plat kultur sel multiwell

Memuatkan dan mengendalikan plat budaya sel berbilang baik:

Plat kultur sel juga mengikuti prinsip asepsis yang ketat ketika melakukan operasi sel. Semua operasi mesti diseragamkan dan saintifik, dan tidak akan menyebabkan kesan tambahan terhadap pertumbuhan sel. Masalah yang paling biasa ialah bagaimana memastikan keseragaman sel -sel selepas menambah sampel dan meminimumkan kesan mengubah medium pada keadaan pertumbuhan sel.

Tanya:
Tutup plat budaya 96 dan 24-baik atau hidangan petri sangat longgar, yang mudah untuk pengudaraan, tetapi akan bakteria, acuan dan bahan pencemar lain juga tergelincir?

Jawapan:
Tudungnya sangat longgar, yang dimiliki oleh budaya separa terbuka, dan tujuannya adalah untuk mengalihkannya (sebenarnya, ia adalah untuk menjadikan CO2 di luar hidangan budaya sepenuhnya bertukar dengan hidangan budaya dan mengekalkan nilai pH budaya medium).
Segala -galanya mempunyai kelebihan dan kekurangan, yang tentunya meningkatkan kemungkinan pencemaran. Di samping itu, ini menyebabkan cecair dalam hidangan untuk menguap, yang terkenal dengan dos yang tepat. Oleh itu, dua langkah berikut diperlukan: a. Udara dalam inkubator mestilah bersih (cahaya ultraviolet biasa, penyulitan alkohol, dan inkubator harus dibuka dan ditutup sedikit sebanyak mungkin) b. Kelembapan dalam inkubator mesti sentiasa disimpan pada 100% (tenggelam dengan air sulingan steril yang diletakkan di inkubator).
Sama seperti hidangan petri, ia juga merupakan bekas dengan tudung terbalik, dan ia tidak akan tercemar. Terutamanya kerana tekanan negatif aliran udara yang dihasilkan oleh kelebihan "L" penutup, terdapat mikroorganisma yang dilekatkan pada habuk, dan habuk yang dibawa oleh aliran udara tidak dapat melalui tepi penutup yang menghasilkan tekanan negatif. Kesan pengudaraan hanya melalui penyebaran udara, dan tiada aliran udara akan dihasilkan, jadi ia hanya akan bernafas dan tidak menembusi bakteria.

Tanya:
Menggunakan plat 24-baik, terdapat operasi di beberapa telaga (di bangku ultra-bersih), dan terdapat sel-sel yang akan dibiakkan di telaga lain. Saya bimbang ini akan menyebabkan pencemaran. Saya tidak tahu apa yang perlu diperhatikan?

Jawapan:
Sekiranya operasi diseragamkan di bangku ultra-bersih, ia harus OK. Saya fikir anda boleh memanfaatkan sepenuhnya penutup plat budaya, cuba untuk mendedahkan hanya lubang untuk dikendalikan, dan menutup lubang lain dengan penutup.
Pertimbangkan secara komprehensif sebelum menggunakan dan memanfaatkan sepenuhnya semua lubang; Jika anda hanya perlu menggunakan beberapa lubang, anda boleh menggunakan hanya satu sisi, dan menutup selebihnya dengan penutup. Saya digunakan untuk menggunakan lubang kanan terlebih dahulu (mudah untuk menambah sampel ke tangan kanan).

Apabila beroperasi, gunakan beberapa slaid kaca untuk menaikkan satu sisi papan, jangan buka penutup sepenuhnya, umumnya tidak ada masalah.
Pengagihan dan penyelesaian sel yang tidak sekata

Tanya:
Sel -sel disuntik pada plat budaya, dan sel -sel sentiasa berkumpul di bahagian periferal, bagaimana untuk menanganinya?

Jawapan:
Bolehkah saya bertanya bagaimana sel anda bercampur? Adakah ia menipis atau menggoncang plat budaya? Sekiranya ia adalah yang terakhir, dan jika ia digoncang dalam bulatan, kemungkinan besar sel -sel akan dibuang ke bahagian periferal kerana daya sentrifugal, mengakibatkan sel -sel yang lebih sedikit di tengah. Lebih dari empat minggu!
Berikut adalah cara yang baik: Sebelum memupuk plat benih, letakkan plat budaya ke dalam inkubator selama beberapa jam ketepuan dan kemudian mengeluarkannya. Kekuatan harus ringan ketika menanam sel. Menambah perlahan -lahan membolehkan penggantungan sel mengalir ke dalam telaga plat, dan sel -sel berbudaya pada dasarnya tumbuh sama rata. Ingatlah untuk tidak pernah goncang dengan shaker, atau sel -sel anda akan berkumpul bersama seperti yang anda katakan.
Lebih kecil diameter lubang plat budaya, semakin jelas fenomena ini. Fenomena ini tidak dapat dielakkan untuk plat 24 dan 96-baik, kerana cecair mematuhi dinding supaya penyelesaian budaya di dalam telaga tidak membentuk tahap cecair, tetapi pinggirnya tinggi, seperti cermin cekung. Walau bagaimanapun, apabila menggunakan kedua -dua jenis plat orifis ini, tidak mungkin untuk menambah jumlah penyelesaian budaya yang mencukupi kerana keperluan untuk campur tangan tambahan, supaya sel -sel akan muncul "pengumpulan kelebihan" bersama -sama dengan penyelesaian budaya. Ia bergantung kepada penunjuk apa yang perlu anda perhatikan. Jika ia adalah MTT, imunohistokimia akan menjejaskan keputusan disebabkan oleh lapisan sel.
Apabila mencerna sel, perhatikan pipet sama rata untuk mengelakkan rumpun sel, dan jumlah penyelesaian budaya di dalam telaga harus mencukupi. Umumnya, tambahkan penyelesaian budaya yang cukup apabila inokulasi, dan tukar penyelesaian sekali apabila menambah campur tangan. Jumlah penyelesaian budaya yang ditambah kepada penyelesaian intervensi adalah sama dengan jumlah penyelesaian budaya pada masa inokulasi, dalam kes ini, fenomena "set tepi" akan diperbaiki, jadi anda mungkin juga mencubanya.

Tanya:
Apa yang saya lakukan ialah percubaan pembentukan plak. Adalah lebih baik untuk menyebarkan sel -sel dalam lapisan seragam. Kebanyakan lubang adalah baik apabila virus disuntik, dan sebahagian daripadanya tidak seragam. Terdapat perbezaan yang besar dalam kumpulan sel. Saya ingin bertanya kepada anda kaedah apa yang anda gunakan semasa menambah sel?

Jawapan:
Adalah penting untuk pipet sel-sel ke dalam penggantungan sel tunggal selepas pencernaan! Pastikan bilangan sel di setiap telaga adalah konsisten apabila memisahkan plat!
Sudah tentu, terdapat juga faktor pemprosesan. Paralelisme antara telaga juga sangat penting. Sebagai contoh, apabila menambah ubat, campurkan ubat selepas pencairan untuk memastikan kepekatan setiap telaga adalah konsisten!
Selain itu, apabila menambah sel dan ubat, kumpulan ujian dan kumpulan kawalan perlu ditambah pula untuk mengelakkan perbezaan kepadatan sel dan kepekatan dadah yang disebabkan oleh urutan menambah sampel!

Tanya:
Pukulan sudah seragam, tetapi papan, 6 lubang, dan 24 lubang selalu agak tidak sekata, dan sedikit tertumpu di tengah. Selain itu, jelas bahawa pengiraan dilakukan, dan selepas satu atau dua hari, ketumpatan setiap lubang adalah berbeza, yang akan menjejaskan pengesanan. Adakah cara yang baik?

Jawapan:
Jika anda menggunakan pipet pasteur, jangan menghisap terlalu banyak setiap kali, kerana sel -sel di dalam pipet secara automatik akan tenggelam, selalunya bilangan sel dalam beberapa lubang pertama adalah besar, dan penggantungan sel sering seragam, dan cecair akan Ikuti laluan S-shape.
Jika anda menggunakan pipet, petua perlu diproses dan dikeluarkan untuk mengelakkan merosakkan sel, supaya setiap kali cecair diambil sepadan dengan telaga. Lebih tepat untuk menambah lubang satu sama lain dengan tip. Tetapi juga memberi perhatian kepada pencampuran penggantungan.

Untuk menubuhkan kumpulan selari, n mestilah cukup besar (anda boleh mengira).

Jangan goncang selepas penyaduran, kerana goncangan akan menyebabkan sel -sel agregat ke arah pusat. Lebih baik papan sekali.

Plat kultur sel porous Yongyue Medical selalu menganggap kawalan kualiti sebagai kehidupan perusahaan, dan mengejar peningkatan daya saing perusahaan yang berterusan. Syarikat itu selalu mematuhi semangat perusahaan mematuhi undang-undang dan peraturan, yang ketat dengan disiplin diri, menjadi lembut, dan berani untuk bertanggungjawab sebagai standard dalam operasi, mengekalkan dan mengembangkan pasaran dengan kualiti dan perkhidmatan yang sangat baik, dan memenuhi keperluan keperluan pelanggan ke tahap yang paling besar. . Win-win dengan pelanggan adalah matlamat pembangunan kami. Yongyue Medical! Rakan kongsi anda yang dipercayai. Kami sanggup bekerjasama dengan tulus dengan anda untuk mencipta masa depan yang lebih baik.